非洲豬瘟PCR儀的這些知識值得我們學(xué)習(xí)
更新時間:2023-04-17 點(diǎn)擊次數(shù):697
非洲豬瘟PCR儀(African Swine Fever PCR Analyzer)是一種集DNA特異性擴(kuò)增與檢測于一體的實(shí)驗(yàn)室分析設(shè)備。利用引物擴(kuò)增技術(shù)來檢測因非洲豬瘟病毒產(chǎn)生的目標(biāo)DNA片段。在使用時,需要注意如何選擇合適的引物以及正確的操作流程和步驟。該儀器可用于從血樣、組織、糞便、尿液等多種來源中檢測非洲豬瘟病毒的存在,且其檢測結(jié)果具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等特點(diǎn)。屬于利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術(shù)來檢測目標(biāo)序列的檢測儀器之一。將待檢測的DNA樣本與引物、縮合酶及核酸酶自由水混合放入試管內(nèi),并通過恒定溫度四次循環(huán)擴(kuò)增。其中每個循環(huán)包括模板退火、引物連接、DNA聚合和擴(kuò)展階段。所需的引物為兩種,即左、右引物,二者體積成一比例計算加入;縮合酶與核酸酶是配位縮合酶及回轉(zhuǎn)酶。配位縮合酶作用于引物5'-端的縮合反應(yīng),解鎖并啟動雙鏈DNA擴(kuò)增的階段(即退火和連接)。而回轉(zhuǎn)酶能夠解旋雙鏈、釋放目標(biāo)序列并啟動DNA合成。
實(shí)際應(yīng)用中,非洲豬瘟PCR儀的檢測過程可以分為三個主要部分,即樣品制備、擴(kuò)增反應(yīng)和結(jié)果分析。在樣品制備階段,需要從目標(biāo)組織、血液等樣本中提取出目標(biāo)DNA;而擴(kuò)增反應(yīng)階段則需要將上述提取到的DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),并通過PCR技術(shù)擴(kuò)增出目標(biāo)片段;在結(jié)果分析階段,則可通過熒光信號檢測系統(tǒng)檢測PCR反應(yīng)產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度值,以識別是否存在非洲豬瘟病毒(ASFV)。
在具體的操作過程中,操作人員需要按照非洲豬瘟PCR儀操作步驟進(jìn)行相應(yīng)的設(shè)定,包括樣品裝載、數(shù)據(jù)輸入及儀器開機(jī)等幾個主要流程。此外,在使用基于PCR技術(shù)的檢測工具時,還需要注意如何選擇引物合適的生化特性、協(xié)同作用、PE(polyethylene)交聯(lián)改變溫度敏感性、HDA (Hyper-dimensional Amplification)雜交寡核苷酸光敏化等多個操作因素。這些因素的掌握,不僅會影響檢測效率、準(zhǔn)確性和方便性,還會直接影響食品安全標(biāo)準(zhǔn)。